O型口蹄疫抗體檢測試劑盒使用說明書

O型口蹄疫抗體檢測試劑盒使用說明書
 
【產(chǎn)品簡介】
口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗體檢測試劑盒用于檢測豬、牛、羊血清中的O型口蹄疫病毒抗體，用于評(píng)估口蹄疫苗免疫狀況。
本試劑盒采用阻斷ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被口蹄疫病毒抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有口蹄疫病毒抗原特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)的抗VP1單抗，樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合；經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號(hào)與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度OD值。
【組份】

1	抗原預(yù)包被板條	1/2塊	6	終止液	6/11ml
2	酶結(jié)合物	7/14ml	7	陰性對(duì)照	0.25/0.5ml
3	10倍濃縮洗滌液	50/100ml	8	陽性對(duì)照	0.15/0.3ml
4	顯色液	11/22ml	9	封板膜	2/4張
5	說明書	1份	10	樣本稀釋液液	8ml

 
【需自備的設(shè)備及試劑】
1. 微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl。
2. 一次性移液器吸頭。
3. 量筒：500ml。
4. 96孔板酶標(biāo)儀。
5. 蒸餾水或去離子水。
6. 洗瓶或洗板機(jī)。
【樣品制備】
取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【洗滌液的準(zhǔn)備】
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
【注意事項(xiàng)】
1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。
2. 不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
3. 底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。
4. TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。
6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。
8. 抗原包被板為一次性用品，不得重復(fù)使用。
【操作步驟】
1. 每次試驗(yàn)均設(shè)置陽性對(duì)照1孔、陰性對(duì)照2孔；
2. 將待檢板條按20ul/孔加入樣本稀釋液；
3. 將樣品和陰陽性對(duì)照品按20ul/孔加入孔內(nèi)（移液器槍頭請(qǐng)勿混用）；
4. 每孔加酶結(jié)合物60μl，輕微振蕩混勻，蓋上封板膜，置37℃溫育45分鐘。
5. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，最后在干凈吸水紙上拍干。
6. 每孔加顯色液100μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
7. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。
【結(jié)果判定】
    用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。
試驗(yàn)成立的條件是：
陰性對(duì)照（N）OD值>0.5、同時(shí)陽性對(duì)照(P)阻斷率>45%；
計(jì)算方法：
PI (阻斷率)=  1 —（樣品OD值 ÷ 陰性O(shè)D均值）x100%
陰陽性判斷：
牛、羊樣本
PI(阻斷率)>45%則判斷為陽性；
PI≤45%則判斷為陰性。
【有效期】
貯存方法： 2 - 8oC下貯存。
有效期： 12個(gè)月。
 
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