小鼠臟器組織中性粒細胞分離液KIT說明書
 
 
本品用于分離小鼠臟器組織中性粒細胞
 
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	樣本稀釋液	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
D	紅細胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml
E	紅細胞沉降液（6%羥乙基淀粉）	HES-TBD550-80	80ml
F	試劑 F	F2013TBD	200ml
G	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備組織單細胞懸液，制備方法詳見“鼠組織單細胞懸液制備技術”。

 

• 取一支 15ml 離心管，先加入分離液 1：3ml，后加入 80%濃度分離液 1 溶液（分離液 1：

 
樣本稀釋液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。
 

• 用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上，650-800g ，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量，需相應調(diào)整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后，稀釋液層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細胞層，取下層白色環(huán)狀中性粒細胞層（會有少量紅細胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min。

 

• 離心后棄上清，后可通過兩種方法去除紅細胞。

 
方法一：細胞沉淀用紅細胞裂解液去除紅細胞（具體方法參見“紅細胞裂解液說明書”）。
 
方法二：
 
1.  細胞沉淀用 1ml 紅細胞沉降液重懸，加于 3ml 分離液 1 之液面上，400g 離心 20min。

• 取白色環(huán)狀細胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復洗滌 2-3 次，獲得目的細胞（如仍有少量紅細胞混雜，使用紅細胞裂解液去除紅細胞）。

 
分離圖例：
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，需在取樣 2h 內(nèi)進行實驗。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 分離液用量大于骨髓單細胞懸液樣本量時，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術支持以尋求幫助.

 

• 請勿使用具有紅細胞保護成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細胞不能完全沉至離心管底部）。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
 
【相關實驗技術方案】