產(chǎn)品類別：造血干細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號：LGS1068CB05
 
產(chǎn)品名稱：人臍帶血干細(xì)胞分離液KIT醫(yī)用級
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
 
產(chǎn)品價格：￥1800.00元

人臍帶血干細(xì)胞分離液KIT說明書
 
【產(chǎn)品簡介】
 
臍帶血收集采用自然放血且從產(chǎn)房采集到細(xì)胞分離時長一般大于 2 小時，與外周血靜脈采血且及時分離相比會影響分離效果，為此，灝洋優(yōu)化配方以提高臍帶血干細(xì)胞分離得率，請廣大醫(yī)療及科研用戶使用并提出寶貴意見。
 
【包裝規(guī)格】
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	人臍帶血干細(xì)胞分離液	LGS1068CB-200	200ml
B	紅細(xì)胞沉降液（贈品）	HES-TBD550	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118-100	200ml
D	說明書		1 份

 
【實驗前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
方法一：
 

• 新鮮抗凝臍血與生理鹽水及紅細(xì)胞沉降液（6%羥乙基淀粉）按 1：1：1 的比例混合，自然沉降 30min（具體沉降時間應(yīng)根據(jù)不同樣本對應(yīng)調(diào)整以保證沉降效果）。
• 沉降后取上層液體，300g 離心 15min，棄去 50%上清，以剩余 50%上清重懸沉淀，制成細(xì)胞懸液。

 

• 取 50mLPBMC 高效離心管，加入 15ml 分離液，200g 離心 1min 將分離液全部離心至隔片以下，傾去隔片上殘留的分離液。

 

• 將細(xì)胞懸液加至隔片上，400-500g，離心 20-30min。

 

• 離心后取白色環(huán)狀目的細(xì)胞層，清洗后重懸備用。

 
方法二：
 

• 新鮮抗凝臍血與紅細(xì)胞沉降液（6%羥乙基淀粉）按 1：1 的比例混合。

 

• 取 50mLPBMC 高效離心管，加入 15ml 分離液，200g 離心 1min 將分離液全部離心至隔片以下，傾去隔片上殘留的分離液。

 

• 將與沉降液混勻的樣本加至隔片上，400-500g，離心 25min。

 

• 離心后取白色環(huán)狀目的細(xì)胞層，清洗后重懸備用。

 
【注意事項】
 
1. 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，
 
最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

 

• 如實驗后細(xì)胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗干細(xì)胞提取率及純度均大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
 

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
	（4.0-5.5）×1012				（1.0-3.0）×1011
含量（個/L）		中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

 

• 所獲得干細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

• 所獲得干細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

• 所獲得干細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

 
D.PCR 技術(shù)
 
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1.  由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
 
 

	出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案
	離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
	離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
	離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度
	離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

 

• 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

 

• 本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

 
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到最佳分離效果，離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。