一步法RNA提取試劑 TRIZOL
簡介:
TRIzol是一種新型總RNA抽提試劑，可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫*酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。
TRIzol在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性，因此對純化DNA及標(biāo)準(zhǔn)化RNA的生產(chǎn)十分有用。
TRIzol的成分: TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質(zhì)，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫*酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase（RNA酶）。
※0.1%的8－羥基喹啉可以抑制RNase，與氯仿聯(lián)合使用可增強抑制作用。
※異硫*酸胍屬于解偶劑，是一類強力的蛋白質(zhì)變性劑，可溶解蛋白質(zhì)并使蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)消失，導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)降解，核蛋白迅速與核酸分離。
※β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。 TRIzol的使用方法: 用勻漿器將組織磨碎，加入TRIzol處理組織。5分鐘后加入氯仿，以每分鐘12000轉(zhuǎn)離心5分鐘，樣品即分成水樣層、中間層和有機層。
※RNA存在于水樣層中，收集水樣層后可以通過異丙醇沉淀RNA來還原。
※在除去水樣層后，有機層中的DNA和蛋白質(zhì)也能相繼以沉淀的方式還原：乙醇能使中間層的DNA沉淀析出，在有機層中加入異丙醇能沉淀出蛋白質(zhì)。 每100ml TRIzol可以抽提100個六孔板中的樣品或100個50-80mg的組織樣品。無論樣品是人、動物、植物還是細菌組織，該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(約五百萬個)及大量的組織(≥1g)和細胞(超過一千萬個)均有較好的分離效果。 每一百萬細胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA，每毫克組織用TRIzol抽提可得1-10微克RNA（產(chǎn)量因細胞和組織不同而異）。 TRIzol操作上的簡便性允許其同時處理多個樣品，所有的操作可以在一小時內(nèi)完成。
TRIzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白質(zhì)的污染，故而能夠作RNA 印跡分析、斑點雜交、poly(A)+ 選擇、體外翻譯、RNA酶保護分析和單分子克隆（PCR）。
※如果是用于PCR，當(dāng)兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時，建議用級聯(lián)擴大的DNase I(Cat. No. 18068)來處理抽提的總RNA。
※TRIzol試劑能促進不同種屬、不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15kb之間的不連續(xù)的高分子量條帶（mRNA和hnRNA成分），兩條優(yōu)勢核糖體RNA條帶位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA, 5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時，其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA時宜-70℃沉淀過夜。 TRIzol對人體有害，使用時應(yīng)戴一次性手套，注意防止濺出。
Invitrogen相關(guān)資料: Invitrogen一步法總RNA提取試劑/Trizol Reagent 使用Invitrogen公司的TRizol試劑，可快速簡單地獲得高純度總RNA。
Invitrogen公司的一步法總RNA提取試劑TRIZOL比其他純化方法可提高產(chǎn)率30%-150%。這種TRIZOL試劑的酚和異硫*酸胍的均相溶液可直接用于從人類、動物、植物、細菌等的細胞或組織中提取總RNA、DNA或蛋白質(zhì)。 TRIZOL試劑純化的RNA可用于PCR、RNA印跡分析、poly(A)+篩選或斑點雜交。純化的DNA和蛋白質(zhì)分別適用于DNA和蛋白質(zhì)印跡分析。
◆ 獲得高純度RNA（A260/A280>1.9）
◆ 在1小時內(nèi)分離RNA；在3小時內(nèi)分離DNA或蛋白質(zhì)
◆ 鮮明的紅色染料使去除含RNA的液相簡單便捷
◆ 無論是小量的細胞（5×106）或組織（50-100mg）還是大量的細胞（107）或組織（>1g）都可得到出色的結(jié)果
◆ 在4℃條件下可穩(wěn)定保存兩年以上
◆ 可使用TRIZOL用于組織或細胞；
使用TRIZOL LS用于血液或其他液體樣品 品名: TRIzol Reagent Cat. No. 15596-026 TRIzol? Reagents are ready-to-use, monophasic solutions of phenol and guanidine isothiocyanate suitable for isolating total RNA, DNA, and proteins (1-6). Isolation procedures are based upon improvements to the single-step RNA isolation method General Specifications Brand TRIzol? Final Product Transcriptome RNA micro RNA Total RNA High Throughput Compatibility Manual Protocols Isolation Technology Organic Extraction Number of Reactions 100 Preps Product Size 100 ml Purification Time 1 hr Quantity 1 Sample Type (General) Viral Samples Plant Samples Tissue Blood Bacteria Yeast Cells Scale Scaleable Starting Material (Cell #) Up to 1g Tissue, Up to 1 x 10^7 cells System TRIzol Yield (up to) 8 mg Top Contents & Storage: TRIzol? and TRIzol? LS Reagents include the indicated amount of reagent. The TRIzol? Max? Bacterial RNA Isolation Kit contains TRIzol? Reagent and Max Bacterial Enhancement Reagent. Store at 2°C to 8°C.
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