提供商:          上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱:        網(wǎng)狀纖維染色銀染實(shí)驗(yàn)服務(wù)
規(guī)格:            樣本
價(jià)格：60
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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網(wǎng)狀纖維染色銀染實(shí)驗(yàn)服務(wù)
 
實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡介:網(wǎng)狀纖維(reticular fiber)網(wǎng)狀纖維在疏松結(jié)締組織中含量較少,纖維較細(xì)，有分支,彼此交織成網(wǎng)狀。用浸銀法可將纖維染成黑色，故又稱嗜銀纖維(argyrophilic fiber)。電鏡觀察，網(wǎng)狀纖維具有等間距的橫紋結(jié)構(gòu)，其化學(xué)成分也是膠原蛋白，和膠原纖維相似。網(wǎng)狀纖維的嗜銀性是由于包在原纖維上的糖蛋白所致。
實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理:氨銀液被組織吸咐與組織中的蛋白結(jié)合，經(jīng)甲醛還原成黑色的金屬銀沉積于組織內(nèi)及表面。用氯化金調(diào)色后，再用硫代硫酸鈉液洗去未還原的銀鹽,從而將組織內(nèi)的網(wǎng)狀纖維清晰地顯示出來。
 
實(shí)驗(yàn)操作流程:
1、切片脫蠟至水，蒸餾水洗,
2、用0.5%高 錳酸鉀氧化5min,
3、自來水洗，繼用蒸餾水洗,
4、用2%草酸漂白切片2min,
5、自來水洗，蒸餾水洗,
6、2%硫酸鐵鈹媒染5min,
7、水洗，蒸餾水洗,
8、滴入氨性銀溶液浸染3 -5min,
9、蒸餾水洗數(shù)次,
10、 10%甲醛液還原5-10min,
11、水洗2min,
12、用核固紅染色10-15min,
13、水洗10min, 各級酒精脫水,
14、 常規(guī)透明，中性樹膠封固。
結(jié)果:網(wǎng)狀纖維黑色，核紅色,膠原纖維黃棕色。
 
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
客戶提供:
1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或80度保存，組織不少于100mg;
2、培養(yǎng)細(xì)胞:通過細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2x106個(gè)細(xì)胞于EP管,加入0 .5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，溝后保存于冰箱(-80°C, 避免反復(fù)凍融) ;
3、血液細(xì)胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入05ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,保存(-80°C可長期保存,避免反復(fù)凍融) ;
4、血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(49C可保存15-20天, -80°C可長期保存，避免反復(fù)凍融) ;
5、石蠟切片，冰凍切片以及細(xì)胞爬片，涂片等。
6、樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本
組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后，加冰袋寄送;
細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出) ;
血清或上清液直接加冰袋寄送(視快遞時(shí)效一般控制在2-3天內(nèi))，
 
交付標(biāo)準(zhǔn):
1、圖片;
2、完整項(xiàng)目報(bào)告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果)。
其他:
1、所使用的玻璃儀器，須用清潔液處理。
2、配制氨銀溶液時(shí)，氨水加入的量不能過多或不足，過多感應(yīng)下降，會使液體過堿，滴染時(shí)，切片容易脫落，過少則感應(yīng)上升，浸染效果不佳，不好掌握。
3、配制氨銀液時(shí)，有可能用玻璃蒸餾水。
4、使用的化學(xué)試劑應(yīng)盡量用分析純以上。
5、切片氧化漂白應(yīng)徹底，不能使殘存的福爾馬林留于片上，否則將導(dǎo)致過早還原而使浸染不均勻。
6、如果有某種原因而導(dǎo)致切片脫落時(shí)，應(yīng)使用涂膠的載片，以增加附貼性。
7、如有可能，氨銀溶液以新配為佳，但也可保存于4°C冰箱中達(dá)一 個(gè)月左右,這種液體易揮發(fā)，用后即須蓋緊，當(dāng)沉淀物出現(xiàn)時(shí)，該溶液應(yīng)拋棄。
8、應(yīng)秀氯化金調(diào)色時(shí)，可將膠原纖維著染的黃棕色去除掉。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
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